糖尿病（diabetes mellitus，DM）是当今一种常见的内分泌代谢紊乱性疾病，已严重威胁到人们的生存及生活质量。糖尿病有1型糖尿病、2型糖尿病、特殊类型糖尿病、妊娠期糖尿病共四种类型。近年来研究表明，胰岛素抵抗、胰岛β细胞受损等情况均可导致2型糖尿病的发生。在临床上2型糖尿病的定义为一种高糖血症，特征为长期的胰岛素抵抗伴有持续加重的胰岛细胞功能损伤。有研究表明，黄酮类化合物具有器官保护作用，主要是通过抗脂质过氧化、清除氧自由基等方式发挥抗氧化作用的生物活性。槲皮素是一种天然的黄酮类化合物，在花、水果、蔬菜等天然植物中分布较广。本实验通过研究槲皮素对db/db小鼠胰岛形态结构的影响，为探索其新用途及临床应用等提供相关依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
8-9周龄雄性SPF级db/db小鼠，体重42~46g；同源同龄雄性db/m小鼠，体重21~25g，均购于常州卡文斯实验动物有限公司，许可证号
：SCXK（苏）2001-0003。
1.1.2 药物与试剂
槲皮素（sigma公司）纯度>99%。多聚甲醛（北京索莱宝科技有限公司）、无水酒精（德州市富凯化工有限责任公司）、二甲苯（济宁宏明化学试剂有限公司）、苏木精染色剂（南京奥多福尼生物科技有限公司）、伊红生物染色剂（上海展云化工有限公司）、石蜡（石家庄恒勘化工有限公司）、PBS粉末（北京雅安达生物技术有限公司）、马松染色试剂盒（索莱宝科技有限公司）。
1.1.3 主要仪器
罗氏血糖仪及试纸（德国罗氏诊断有限公司）、高倍显微镜（日本奥林巴斯有限公司）、真彩病理图像分析系统（高腾科技有限公司）、生物组织自动石蜡包埋机（湖北泰维科技实业有限公司）、轮转式切片机（德国Leica公司）。
1.2 方法
1.2.1 小鼠分组及给药
采用尾静脉取适应性喂养1周的db/db小鼠血，血糖仪测定，取两次随机血糖值均大于16.7mmol/L的小鼠进行实验，随机分为模型（M）组、槲皮素（QUE）组，以db/m为正常对照组，每组10只。QUE组每天灌胃QUE100mg/kg，模型组和正常组均给予等容积蒸馏水灌胃。各组每天上午9时给药一次，持续8周。
1.2.2 随机血糖测定
分别在给药前、后用血糖仪测随机血糖。
1.2.3 胰腺组织HE染色和马松染色光镜观察
处死第8周末次给药后的小鼠，解剖胰腺，固定、包埋、切片后行HE染色，马松染色。所有染片光镜下观察并摄片。
1.2.4 统计学分析
所有数据使用SPSS17.0统计软件进行分析。结果以均数
标准差（
）表示，组间比较采用方差分析，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 一般状态
正常组小鼠精神状态良好、活动灵活、毛发光亮；模型组小鼠精神状况不佳，活动迟缓、毛发暗沉无光、肥胖、明显多饮多食多尿；槲皮素组小鼠以上情形有相应好转。
2.2 QUE对db/db小鼠体重与随机血糖的影响
db/db小鼠体重明显高于db/m小鼠（P<0.01），QUE小鼠体重略低于模型组，但二者无统计学差异（P＞0.05）。模型组的随机血糖明显高于正常组（P<0.01），与模型组比较，QUE组随机血糖明显降低（P<0.05），见表1。
表1 QUE对db/db小鼠体重与血糖的影响（`x±s，n=10）
| 组别 | 体重（g） | 随机血糖（mmol·L-1） |
| db/m正常组 | 23.62±1.27 | 5.38±0.49 |
| db/db模型组 | 56.52±2.16△△ | 21.67±2.44△△ |
| db/db QUE组 | 54.34±2.25△△ | 17.84±2.10△△* |
注：与正常组比较△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
2.3 HE染色
HE染色显示正常组小鼠胰岛细胞及腺泡（图1，A）未发生变形、坏死，并且没有炎细胞浸润。同时，正常组小鼠胰岛细胞数量多、排列均匀、形态规则、胞浆丰富、界限清楚、胞核清晰居中。模型组小鼠（图1，B）胰岛数量减少、形态不规整、胰岛细胞体积变小、腺胞萎缩变小、结构不完整、排列不均匀、胞浆部分出现核固缩和核碎裂。与模型组小鼠相比较，QUE组小鼠（图1，C）较模型组胰岛细胞形态规则、数量增多、体积变大，界限较清楚，但排列拥挤，胞浆不丰富，细胞核较密集，部分出现核偏位现象。
图1 HE染色光镜观察胰腺组织病理变化（x 200），A：正常组，B：模型组，C：槲皮素组
2.4 Masson染色
db/m正常组（图2，A）小鼠胰腺组织镜下未见蓝染的胶原组织，胰岛细胞形态完整、细胞核居中、胞界清晰；db/db模型组（图2，B）小鼠胰腺组织间可见较多蓝染胶原组织；与模型组相比，QUE组（图2，C）胰腺组织间可见少量蓝染胶原组织，胰岛细胞形态较模型组完整，核较多。
图2 马松染色光镜观察胰腺组织纤维化程度（x 200），A：正常组，B：模型组，C：槲皮素组
3 讨论
引起2型糖尿病患者血糖上升的原因主要有两个，分别为胰岛素分泌相对不足和胰岛素抵抗。胰腺是胰岛素分泌的重要器官，在糖尿病发病初期，胰岛β细胞分泌功能代偿性增强，表现为胰岛素抵抗和高胰岛素血症，随着病程的发展，胰岛β细胞功能代偿逐渐衰退，出现胰岛β细胞功能衰竭和细胞凋亡，将引起糖代谢异常并发展为糖尿病。因此，寻找抑制或延缓胰岛病理损伤及β细胞功能失代偿的药物意义重大。
db/db小鼠是一种先天肥胖性2型DM小鼠模型，属于C57B1/KS品系小鼠，其模型具有肥胖，血脂和血糖升高，胰岛素抵抗等特性，是研究2型糖尿病的理想模型。因而本实验选用db/db小鼠，进行槲皮素给药，结果表明槲皮素可以改善糖尿病小鼠胰腺及胰岛病理损伤、增加胰岛数量及增大胰岛面积；通过马松染色观察表明，糖尿病胰腺有胶原纤维增生，尤其是胰岛组织更明显，β细胞体积变小，胞浆内线粒体等细胞器和分泌颗明显减少。与模型组比较，槲皮素能明显抑制胶原纤维增生，减轻胰岛病理损伤，增加胞内分泌颗粒，减轻胰岛细胞损伤，从而发挥降低糖尿病小鼠血糖作用。
槲皮素是一类分布于植物中的多酚羟基的黄酮类化合物，也是脂溶性化合物，具有降血脂、抗氧化、清除氧自由基、抗纤维化等作用，但目前对糖尿病胰岛病理损伤的影响罕见报道。长期高血糖，可引起一系列氧化应激及产生大量炎症介质，从而损伤组织器官。槲皮素具有改善糖尿病胰腺及胰岛组织病理损伤作用，其机制可能是通过抗氧化、抗炎、抑制胶原生成等，确切机制值得进一步研究。
参考文献
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基金项目：河北省中医药管理局科学研究计划项目（QN2017083）；国家级大学生创新实验计划项目（201710081026）；华北理工大学大学生创新实验计划项目（X2017026）。
收稿日期：2018-06-25
作者简介：魏敏（1996-），女，江苏赣榆人，华北理工大学学生，研究方向：药物防治糖尿病和心血管疾病。
